Pembalap KTM Factory Pedro Acosta memimpin tes terakhir musim 2025 di Misano, di mana Yamaha melakukan uji coba motor MotoGP bertenaga V4 terbarunya. Acosta meraih posisi teratas dengan catatan waktu tercepat, diikuti oleh beberapa pembalap lain seperti Marc Marquez, Francesco Bagnaia, dan Marco Bezzecchi. Bezzecchi memangkas waktu setengah detik sebelum Alex Marquez berhasil mengungguli catatan waktu tersebut. Namun, Acosta kembali naik ke posisi teratas dengan catatan waktu paling cepat. Uji coba ini juga melibatkan pembalap-pembalap lain seperti Raul Fernandez, Fabio di Giannantonio, dan Jorge Martin, yang melakukan tes dengan berbagai perangkat baru.
Yamaha menjadi fokus utama dalam uji coba tersebut, membawa dua motor M1 bertenaga V4 untuk dipersiapkan dalam Grand Prix San Marino mendatang. Meskipun demikian, beberapa pembalap seperti Miguel Oliveira tidak mendapat kesempatan untuk mencoba motor V4 baru. Quartararo, Rins, dan Miller adalah pembalap Yamaha yang mencoba motor tersebut, dengan Quartararo menyampaikan kekecewaannya terhadap performa M1 terbaru. Sementara itu, Miller merasa positif dengan kemampuan motor baru tersebut.
Selain Yamaha, Honda juga membawa pembaruan pada motor mereka, sementara Aprilia melakukan peningkatan pada elektronik, set-up, dan suku cadang baru. Ducati tetap tertutup mengenai rencana uji coba mereka. Dua pembalap, Joan Mir dan Ai Ogura, absen pada sesi uji coba karena pemulihan dari kecelakaan di GP San Marino sebelumnya. Pembalap penguji dari KTM, Ducati, dan Honda juga turut serta dalam tes tersebut. Seperti Dani Pedrosa, Michele Pirro, dan Takaaki Nakagami. Kesimpulan dari tes ini menunjukkan perkembangan dan pengujian yang terus dilakukan oleh tim-tim MotoGP untuk meningkatkan performa mereka di lintasan.